Trong quá trình thí nghiệm, do sự khác biệt về tính chất khác nhau của mẫu, kết quả tinh khiết tách dự kiến chỉ có thể đạt được nếu phương pháp ly tâm chính xác được chọn. Phương pháp ly tâm thường dùng chủ yếu là phương pháp ly tâm chênh lệch tốc độ, phương pháp ly tâm gradient mật độ. Trong đó phương pháp ly tâm gradient mật độ lại có thể chia nhỏ thành phương pháp ly tâm vành đai tốc độ và phương pháp ly tâm gradient mật độ bằng nhau. Kỳ này giới thiệu cụ thể với mọi người phương pháp ly tâm chênh lệch tốc độ ly tâm.

Sự khác biệt của phương pháp ly tâm Tốc độ ly tâm

Phương pháp ly tâm khác biệt (Differential velocity centrifugation method)

Nguyên tắc của phương pháp ly tâm vi sai

Sử dụng sự khác biệt trong hệ số lắng của các thành phần trong mẫu, áp dụng lực ly tâm khác nhau cho các hạt khác nhau. Sau nhiều lần ly tâm, tốc độ ly tâm tăng dần, các hạt khác nhau sẽ lần lượt lắng xuống, do đó đạt được tách ly tâm.

Nguyên lý ly tâm vi sai có thể được mô tả bằng biểu thức lực ly tâm: F=ma, trong đó a=ω 2R.

Do khối lượng nhỏ của các hạt có kích thước hạt nhỏ, lực ly tâm cần thiết khi tách là lớn. Để đáp ứng nhu cầu của lực ly tâm lớn, cần phải tăng tốc độ quay của nó trước khi nó có thể được tách ra. Tách các hạt có kích thước hạt khác nhau bằng các lực ly tâm khác nhau là phương pháp tách động học, đặc biệt là các hạt có tốc độ lắng khác nhau nhiều hơn sử dụng phương pháp tách này.

Nếu trong mẫu tách có ba loại hạt có kích thước hạt lớn và nhỏ khác nhau, lực ly tâm khác nhau được áp dụng cho chúng, các hạt có kích thước hạt lớn, khối lượng lớn hơn, sẽ lắng xuống đầu tiên; Tách chất lỏng thượng lưu, ly tâm lần thứ hai của chất lỏng thượng lưu ở tốc độ quay lớn hơn, các hạt trung bình được tách ra; Sau đó lấy thanh lọc với lực ly tâm lớn hơn, tốc độ quay cao hơn, sau đó lắng xuống các hạt nhỏ để đạt được sự tách biệt của các hạt khác nhau, như trong Hình 1.

Sơ đồ 1 Ly tâm vi sai

Bởi vì trong kết tủa của mỗi loại hạt luôn chứa một phần của hạt thứ cấp, nếu bạn muốn tinh chế một loại hạt nào đó, bạn cần pha loãng kết tủa của hạt này sau đó ly tâm kết tủa, cuối cùng có thể chuẩn bị hạt có độ tinh khiết lý tưởng.

Ưu điểm và nhược điểm của phương pháp ly tâm vi sai

Ly tâm vi sai chủ yếu được sử dụng để tách các hạt có đường kính và mật độ khác nhau lớn. Ưu điểm của nó là thời gian tách ngắn, độ lặp lại cao và khối lượng xử lý mẫu lớn. Nó có thể được sử dụng để tách ban đầu một số lượng lớn các mẫu.

Tuy nhiên, khi sử dụng phương pháp ly tâm vi sai để tách các mẫu phức tạp, hoặc khi yêu cầu độ tinh khiết tách cao hơn, sẽ cần phải thực hiện ly tâm nhiều lần, hoạt động phức tạp; Thứ hai, do sự lắng đọng của nhiều lần làm sạch, hòa tan và tái lắng đọng, dễ gây ra tổn thất trung gian, sẽ gây ra vấn đề phân biệt ly tâm kém; Ngoài ra, khi tách thực tế, do đối lưu khi ly tâm, khuếch tán và ô nhiễm khi thu kết tủa, việc tách tinh khiết * không thể được thực hiện đối với một số thành phần có hệ số lắng không khác nhau nhiều. Do những hạn chế của phương pháp ly tâm vi sai liên quan đến độ tinh khiết và tỷ lệ thu hồi mẫu, nó chủ yếu được sử dụng để tinh chế tách ban đầu của một số lượng lớn mẫu để chuẩn bị cho bước phát hiện hoặc thử nghiệm tiếp theo.

Ví dụ, chúng ta có thể tiến hành nhiều lần thu thập từng bước ly tâm và kết tủa/làm sạch mô gan động vật với lực ly tâm tương đối khác nhau và thời gian, thu được kết tủa làm giàu phân tách sơ bộ của nhân tế bào, ty thể, lysosome và ribosome của mẫu, được sử dụng cho các xét nghiệm khác trong bước tiếp theo hoặc trong các thí nghiệm tinh khiết tinh tế. Quy trình xử lý cụ thể như sau:

Lớp học ly tâm đang đăng nhiều kỳ, liên tục chú ý tìm hiểu thêm phương pháp ly tâm!