Kể từ những năm 1950, lọc máu đã trở thành một kỹ thuật thường được sử dụng trong phòng thí nghiệm khoa học đời sống để tách các phức hợp phân tử sinh học lớn, mặc dù trong một thời gian dài, do sự phổ biến của siêu lọc và công nghệ ly tâm, kỹ thuật lọc máu đã không được cải thiện nhiều, đặc biệt là phương pháp lọc máu truyền thống do hoạt động tẻ nhạt, tốn thời gian và các lý do khác, sẽ có những rắc rối không nhỏ. Nhưng giờ đây, Spectrumlabs đã giới thiệu một thế hệ mới của các thiết bị lọc máu cấp công nghệ sinh học sẵn sàng để sử dụng, cho phép lọc máu, một kỹ thuật thử nghiệm cơ bản truyền thống, đi một chặng đường dài về tính đơn giản và tiện ích của việc sử dụng.

Thẩm tách là một kỹ thuật để đạt được sự tách biệt dựa trên quá trình khuếch tán chọn lọc của màng bán thấm cho các kích thước khác nhau của các phân tử lớn và nhỏ. Các mẫu protein hoặc axit nucleic thông thường thường chứa các chất phân tử nhỏ không mong muốn, chẳng hạn như dung dịch muối đệm (Tris, PBS), chất khử (disulfitol DTT, beta-mercapoethanol BME) hoặc chất bảo quản (rượu y tế, thuốc kháng khuẩn).

Mẫu được đặt bên trong màng lọc máu, chất lỏng lọc máu được đặt bên ngoài màng lọc máu (thường là 200-300 lần thể tích của mẫu), do đó một gradient nồng độ được hình thành ở cả hai bên của màng, các phân tử sẽ khuếch tán từ một bên của màng qua màng sang bên kia, và zui cuối cùng đạt được sự cân bằng. Chạy thận nhân tạo (khuếch tán) dừng lại sau khi đạt được sự cân bằng. Thông thường, tốc độ khuếch tán sẽ giảm khi tiếp cận trạng thái cân bằng, vì vậy cần phải thay thế chất lỏng lọc máu mỗi lần để duy trì gradient nồng độ, thúc đẩy quá trình lọc máu diễn ra.

Lựa chọn màng là chìa khóa để lọc máu thành công. Khẩu độ của màng bán thấm cần phải đủ lớn để cho phép vật liệu phân tử nhỏ đi qua, nhưng đồng thời cũng đủ "nhỏ" để hạn chế vật liệu phân tử lớn. Màng lọc lý tưởng cần phải rất "mỏng", có lỗ màng lớn nhỏ đồng nhất, và không kết hợp protein hoặc axit nucleic. Chất xơ tái sinh thông thường hoặc chất xơ tái sinh là sự lựa chọn vật liệu màng lọc tương đối lý tưởng.

Một thông số quan trọng khác ảnh hưởng đến việc lựa chọn màng lọc máu là trọng lượng phân tử bị mắc kẹt (MWCO), mà chúng tôi định nghĩa là trọng lượng phân tử của các phân tử có tỷ lệ mắc kẹt màng ít nhất 90%. Tuy nhiên, trong hoạt động thực tế, quá trình khuếch tán của các phân tử qua màng cũng bị ảnh hưởng bởi hình dạng phân tử, mức độ hydrat hóa, điện tích ion và độ phân cực, vì vậy cần phải kiểm tra và đánh giá toàn diện.

Thể tích của mẫu và chất lỏng lọc máu cũng là những thông số quan trọng cần xem xét, lý tưởng nhất là thể tích mẫu nhỏ hơn sử dụng thể tích chất lỏng lọc máu lớn hơn để khuếch đại gradient zui nồng độ. Khối lượng mẫu cần được xem xét vì việc xử lý hoặc ứng dụng mẫu sau khi lọc máu thường có yêu cầu khối lượng nhỏ nhất định. Nhưng chỉ cần có thể đáp ứng yêu cầu khối lượng nhỏ của zui, thường không * chạy thận quá nhiều mẫu. Bởi vì dựa trên diện tích bề mặt màng của một mẫu nhất định, tốc độ lọc máu của mẫu khối lượng nhỏ nhanh hơn nhiều so với mẫu khối lượng lớn. Ngoài ra, mẫu càng tiếp xúc lâu với giao diện pha rắn, khả năng mất mẫu càng cao và khả năng liên kết hoặc biến tính không đặc hiệu của protein hoặc axit nucleic càng cao.

Các vấn đề khác

Trọng lượng phân tử còn lại của màng (MWCO) là bao nhiêu?

MWCO có thể được sử dụng như một chỉ số để đo lường hiệu suất bẫy màng, nhưng MWCO không phải là, giá trị số, vì vậy khi chọn màng MWCO, đề nghị kiểm tra màng của MWCO khác nhau theo yêu cầu của vật liệu phân tử lớn bị chặn và vật liệu phân tử nhỏ cần được khuếch tán để loại bỏ, nói chung * màng MWCO là 50-80% trọng lượng phân tử vật chất cần được giữ lại, đồng thời cần ít nhất 100 lần trọng lượng phân tử vật chất cần được loại bỏ.

Các sản phẩm màng lọc máu ban đầu do công nghệ sản xuất và lý do kiểm soát chất lượng, MWCO thường được kiểm soát trong vòng 2kD-20kD, với sự đổi mới công nghệ, bây giờ chúng tôi có thể cung cấp các sản phẩm màng lọc máu có trọng lượng phân tử rộng hơn, thấp tới 0,1kD và cao tới 1.000kD. Mỗi đặc điểm kỹ thuật của màng lọc máu có đặc tính chặn cụ thể, có thể sử dụng các chất có trọng lượng phân tử đã biết để phát hiện MWCO.

2) Có nhất thiết phải khuấy trong khi lọc máu?

Khuấy có thể làm giảm đáng kể thời gian lọc máu. Tất cả các màng đều có bề mặt bên trong và bề mặt bên ngoài, từ một bên của màng đến một bên của chất lỏng chạy thận không có đường kính cố định, ngược lại, vật liệu trọng lượng phân tử nhỏ trong mẫu khuếch tán vào lỗ màng của bề mặt bên trong, sau đó thông qua bên trong màng, sau đó từ lỗ màng của bề mặt bên ngoài màng đi ra, đi vào lớp khuếch tán bên ngoài màng "vi môi trường", nồng độ vật liệu phân tử nhỏ trong lớp khuếch tán cao hơn đáng kể so với các vị trí khác của chất lỏng chạy thận. Khuấy có thể nhanh chóng và hiệu quả phá vỡ môi trường vi mô của lớp khuếch tán, duy trì gradient nồng độ và đảm bảo lọc máu.

(3) Làm thế nào để kiểm soát nhiệt độ lọc máu?

Nhiệt độ cũng có một số ảnh hưởng đến việc tiến hành lọc máu, vì các phân tử di chuyển và khuếch tán nhanh hơn ở nhiệt độ cao hơn, nhưng chỉ khi nhiệt độ hoạt động không ảnh hưởng đến hoạt động của sản phẩm. Vì vậy, ngoại trừ các mẫu đặc biệt, nó thường được thực hiện ở nhiệt độ môi trường xung quanh hoặc nhiệt độ phòng.

4) Làm thế nào để xác định rằng quá trình lọc máu đã kết thúc?

Phán định kết thúc lọc máu cũng không có tiêu chuẩn đơn giản, đơn giản. Nói chung, lọc máu có thể được coi là hoàn thành miễn là hàm lượng phân tử nhỏ trong mẫu giảm xuống không ảnh hưởng đến các thí nghiệm tiếp theo.

5) Cần tiền xử lý phim?

Màng lọc máu Spectrumlabs đã được xử lý trước khi rời khỏi nhà máy. Một số sản phẩm màng đặc điểm kỹ thuật có thể chứa một lượng nhỏ glycerin hoặc sulfide, thường được loại bỏ bằng cách khuếch tán tự động trong quá trình lọc máu. Nếu các mẫu được xử lý nhạy cảm hơn, màng cũng có thể được rửa trước bằng nước siêu tinh khiết trước khi sử dụng, có thể được loại bỏ bằng chất tẩy rửa kim loại nặng có thể có trong quá trình sản xuất màng.

Thiết bị lọc máu Spectra/Por Float-A-Lyzer G2 sẵn sàng sử dụng (màng CE) sử dụng ống màng đúc sẵn, giúp cải thiện diện tích bề mặt cụ thể của mẫu/màng, rút ngắn đáng kể khoảng cách di chuyển của phân tử và cho phép tốc độ lọc máu nhanh hơn. Thiết bị lọc máu Spectra/Por Micro Float-A-Lyzer Trace-ready-to-use có thể xử lý các mẫu thấp tới 100 μl, chẳng hạn như sử dụng một lượng lớn chất lỏng lọc máu để duy trì gradient nồng độ cao, dẫn đến tốc độ lọc máu *.