Việc chuẩn bị các kháng thể huỳnh quang hoặc các dấu hiệu di truyền để xác định hoạt động của các thụ thể hormone và chất dẫn truyền thần kinh không chỉ khó khăn mà còn rất tốn thời gian. Bài viết này mô tả một phương pháp thay thế hữu ích có thể được sử dụng để ghi lại những thay đổi trong phản ứng sinh lý được tạo ra bởi sự liên kết của một chất chủ vận với các thụ thể tương tự của nó, nhiều trong số đó là các thụ thể được kết nối với protein G. Khi một chất chủ vận liên kết với các thụ thể mà protein G được kết nối, một loạt các phản ứng thác nhanh có thể được kích hoạt, thường dẫn đến sự giải phóng tức thời các ion canxi từ các vị trí lưu trữ nội bào. Trong quá khứ, những thay đổi tức thời về nồng độ ion canxi nội bào ([Ca2+]i) đã được sử dụng trong quá trình tế bào dòng chảy để xác định biểu hiện thụ thể chức năng trong quần thể tế bào, [2] và ở đây chúng tôi thấy rằng hệ thống truyền mẫu nhu động của máy phân tích CytoFLEX mới đặc biệt thích hợp cho nghiên cứu ion canxi dựa trên chất chủ vận. Sự thay đổi [Ca2+] i xảy ra trong các tế bào HEK-293 trong phản ứng kích thích ATP có thể được xác định bằng cách sử dụng chất chỉ thị canxi huỳnh quang màu xanh lá cây dựa trên este ⸺Fluo-4 AM (LifeTechnologies). Cải tiến đơn giản các đường ống của máy phân tích CytoFLEX để dễ dàng truy cập vào các ống mẫu của chất chủ vận ứng dụng; Trong khi đó, cải tiến hơn nữa, bạn có thể thực thi luật phát hiện "ngừng thời gian". Bằng cách sử dụng phản ứng chủ vận như một tiêu chuẩn xác định sinh lý cho các thử nghiệm của chúng tôi, về cơ bản chúng tôi đã có thể xác định thụ thể và chứng minh chức năng của nó một cách kết luận. Tác giả: Ira Schieren1 Peter Racanelli2 Damian Williams
Đơn vị trực thuộc: 1. Viện Y khoa Howard Hughes, Trung tâm Y tế Đại học Columbia 2. Beckman Coulter Inc., Miami, United States 3. Khoa Bệnh học và Sinh học Tế bào, Trung tâm Y tế Đại học Columbia)